Un nuovo studio pubblicato online sul Journal of Nephrology valuta l’impiego del glyoxal acid-free nella diagnostica ultrastrutturale renale, evidenziandone il potenziale come alternativa più sicura e versatile alla glutaraldeide.
L’articolo, intitolato “Glyoxal acid-free as a safer and reliable alternative to glutaraldehyde for renal ultrastructural pathology”, è firmato da Gianandrea Pasquinelli, Francesco Vasuri, Paolo Detillo (Lab Manager di Addax Biosciences), Benedetta Bussolati (founder e socia di Addax Biosciences) e Sabrina Valente.
La microscopia elettronica a trasmissione rappresenta ancora uno strumento fondamentale nella diagnostica delle patologie renali, poiché consente di osservare con grande precisione le strutture microscopiche che compongono la barriera di filtrazione glomerulare.
La preparazione dei campioni destinati a questa analisi si basa tradizionalmente sulla fissazione con glutaraldeide. Questo fissativo, tuttavia, presenta alcuni limiti: è caratterizzato da un profilo di tossicità rilevante e da una capacità di penetrazione nei tessuti relativamente ridotta.
Lo studio ha quindi analizzato la possibilità di utilizzare il glyoxal acid-free per ottenere una conservazione adeguata dell’ultrastruttura renale e recuperare informazioni diagnostiche utili anche da campioni già inclusi in paraffina.
Campioni di tessuto corticale renale umano normale, provenienti da nefrectomie, sono stati fissati in glyoxal acid-free per periodi di 24, 48 e 72 ore e successivamente processati per la microscopia elettronica a trasmissione. Come controllo sono stati utilizzati campioni fissati con glutaraldeide tamponata al 2,5%.
I ricercatori hanno valutato la conservazione di alcuni elementi fondamentali della barriera di filtrazione glomerulare:
- i pedicelli dei podociti;
- i diaframmi di filtrazione;
- le fenestrazioni endoteliali;
- la membrana basale glomerulare.
Sono stati inoltre esaminati campioni fissati in glyoxal acid-free, inclusi in paraffina e successivamente recuperati e riprocessati per l’analisi ultrastrutturale. La ricerca ha infine considerato la qualità dell’istologia convenzionale, dell’immunoistochimica automatizzata e, in via esplorativa, dell’immunofluorescenza.
Dopo 24 ore di fissazione, il glyoxal acid-free ha consentito di preservare le principali componenti ultrastrutturali della barriera di filtrazione glomerulare.
La qualità della conservazione è migliorata sensibilmente prolungando la fissazione a 48 e 72 ore. A questi intervalli sono risultati chiaramente riconoscibili i diaframmi di filtrazione e le fenestrazioni endoteliali, con un contrasto delle immagini ben bilanciato.
Un risultato particolarmente interessante riguarda i tessuti recuperati dai blocchetti di paraffina: anche questi campioni hanno fornito dettagli ultrastrutturali adeguati per rispondere a comuni quesiti diagnostici. Questa possibilità potrebbe offrire maggiore flessibilità nella gestione dei campioni, specialmente nei casi in cui il tessuto non sia stato inizialmente destinato alla microscopia elettronica. L’istologia convenzionale è risultata ben conservata.
Una prospettiva più sicura e versatile
I risultati indicano che, con tempi di fissazione appropriati, il glyoxal acid-free può garantire una conservazione da buona a eccellente dell’ultrastruttura glomerulare renale.
La possibilità di ottenere informazioni diagnostiche utili anche da tessuti già inclusi in paraffina ne rafforza il potenziale come fissativo versatile per la patologia renale.
Il lavoro apre nuove prospettive per l’introduzione di soluzioni più sicure nella diagnostica ultrastrutturale. La ricerca rappresenta un ulteriore passo verso lo sviluppo di processi di fissazione capaci di coniugare sicurezza degli operatori, qualità morfologica e affidabilità diagnostica.
L’articolo è già disponibile in anteprima su PubMed, in attesa della pubblicazione nella versione definitiva:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42700378/